Seasonal variation of the estrous cycle length, corpus luteum area, and size of the pre-ovulatory follicle in Criollo Limonero heifers.

In order to determine whether seasonal variations may influence the estrous cycle length (ECL), corpus luteum size (CLS), maximum area of CL (MACL), day of cycle with maximum area of CL (DCMACL), and pre-ovulatory follicles size (PFS), ten Criollo Limonero heifers were subjected to daily ultrasound ovary scanning throughout their estrous cycles during three seasons: hot-dry (HD), hot-humid (HH), and wind-rain (WR). The effect of season on ECL, MACL, DCMACL, and PFS was analyzed with an ANOVA (PROC GLM, SAS), whereas, for the effect of season on CLS, an ANOVA with repeated measures (PROC MIXED, SAS) was used. Results showed no effect (P > 0.05) of season on ECL, MACL, and DCMACL. However, size of PFS was larger (P < 0.02) during the WR season and the CLS tended (P < 0.09) to be lower during the HH. In conclusion, the relative stability of ECL, MACL, DCMACL, PFS, and CLS measures suggests no major seasonal variations which could imply adaptation capability of Criollo Limonero cattle to the tropical environment.

Efecto del estatus reproductivo de vacas mestizas cebú sobre la producción In Vitro de embriones / Effect of the Reproductive Status of Crossbred Zebu Cows on In Vitro Embryo Production

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del estatus reproductivo (gestantes versus vacías) de hembras mestizas Cebú postmortem sobre el número de ovocitos recuperados, la tasa de división embrionaria y la tasa de producción de blastocitos. Los complejos cúmulo ovocito (CCO) recolectados a través del tasajeo de los ovarios, fueron seleccionados, contados y separados por grupo en: hembras gestantes (ovarios con o sin cuerpo lúteo [CL]) y hembras vacías (ovarios con o sin CL). El número de CCO recuperados fue analizado utilizando el procedimiento GENMOD, asumiendo una distribución de Poisson, mientras que los datos de división y producción de blastocitos fueron analizados utilizando una regresión logística asumiendo una distribución binomial. Se evaluó un total de 4658 CCO obtenidos de 437 ovarios, siendo significativamente mayor (p<0,03), el número de CCO obtenidos de ovarios procedentes de vacas gestantes (12,5±2,8), comparado con el número de CCO provenientes de ovarios de hembras vacías (9,4±2,5). La tasa de división embrionaria, fue significativamente mayor (p<0,006) para el grupo de hembras vacías (42,3±0,01%) con respecto a las gestantes (34,5±0,02); asimismo, la interacción estatus reproductivo por CL afectó (p<0,006) la tasa de división embrionaria: vacas gestantes con CL (Gest-CL) y vacas gestantes sin CL (Gest-NoCL; 31,1±0,02% [76/244] vs. 38,0±0,03% [98/258], respectivamente) y vacas vacías con CL (Va-CL) y vacas vacías sin CL (Va-NoCL; 46,7±0,03% [312/738] vs. 38,0±0,03% [143/376], respectivamente). No hubo diferencia significativa en la tasa de producción de blastocitos a partir de embriones divididos de hembras gestantes (10,7±0,02%; 17/160) comparado con el grupo de hembras vacías (10,0±0,02%; 30/312). Estos resultados indican que la selección de los CCO, con base en el estatus reproductivo de la hembra bovina, es un aspecto importante a tomar en cuenta para mejorar la producción de embriones in vitro.

In order to improve the oocyte selection for in vitro embryo production, the present work evaluated the effect of the reproductive status of postmortem Crossbred Zebu cows (pregnant [P] versus non-pregnant [NP]) on the number of recovered oocytes, the cleavage (number of cleaved embryos/number of recovered oocytes) and the blastocyst production (number of blastocyst/number of cleaved embryos) rates. Cumulus oocytes complexes (CCOs) were selected, counted and separated depending on the donor status: P cows with or without a corpus luteum (CL) and NP cows with (CL) or without (NoCL) a CL. Data for number of recovered oocytes was analyzed using the GENMOD procedure assuming a Poisson distribution, whereas data for cleavage and blastocyst production rates were analyzed using a logistic regression assuming a binomial distribution. The statistical model for all the analyses included the effects of the reproductive status (P vs. NP), presence or not of a CL (CL vs. NoCL) and the interaction of reproductive status x CL. A total of 4658 CCOs obtained from 437 ovaries was evaluated. The number of CCOs collected per ovary from P cows (12.5±2.8) was significantly higher (p<0.03) than from NP cows (9.4±2.5). On the other hand, the cleavage rate was significantly higher (p<0.006) in NoP cows (42.3+0.01%) than in P cows (34.5+0.02). Nevertheless, the interaction between reproductive status and CL affected (p<0.006) the cleavage rate: P-CL: 31.1+0.02% (76/244); P-NoCL: 38.0+0.03% (98/258); NoP-CL: 46.7+0.03% (312/738) and NoP-NoCL: 38.0+0.03% (143/376). There were not differences in blastocyst production rate from cleaved embryos for P cows (10.7+0.02%; 17/160) compared with NoP cows (10.0+0.02%; 30/312). These results show that the reproductive status of a cow should be taken into account for oocyte selection, in order to improve embryo production.

Dinámica folicular ovárica durante el ciclo estral en vacas brahman / Ovarian Follicular Dynamics During the Estrous Cycle in Brahman Cows

Con el objetivo de caracterizar la dinámica folicular durante el ciclo estral (CE) en vacas Brahman, fueron evaluados 12 CE’s con duración promedio de 21,3 ± 0,7 d (rango=19-24 d). Setenta y cinco porciento (9/12) de los CE’s presentaron dos ondas de crecimiento folicular (CF), emergiendo los días 1,6 ± 0,4 y 8,4 ± 0,4 del ciclo, respectivamente. En CE’s de una sola onda (2/12), la emergencia ocurrió el día 14,5 ± 0,7; mientras en el CE de tres ondas (1/12), las mismas emergieron los días 2, 10 y 17. Durante el CE ocurrieron cambios en las clases foliculares (Clase 1 [C1]: ≤5 mm; Clase 2 [C2]: 6-9 mm; Clase 3 [C3]: ≥10 mm). Disminuyó el número de folículos C1 mientras aumentó el número de folículos C2 durante el reclutamiento, y descendió el número de folículos C2 mientras aumentó el número de folículos C3 durante la selección. La tasa de crecimiento (TC) fue mayor (P<0,05) para el folículo dominante (FD1= 0,78 ± 0,1 mm/d; FD2=0,40 ± 0,1 mm/d), que en el folículo subordinado (FS1= -0,01 ± 0,1 mm/d; FS2= 0,22 ± 0,1 mm/d). No hubo diferencia en el máximo diámetro alcanzado por el FD (FD1= 12,2 ± 0,4 mm; FD2= 12,7 ± 0,4 mm). El diámetro del cuerpo lúteo (CL) aumentó (fase de crecimiento) hasta alcanzar su máximo tamaño (fase de meseta), disminuyendo hasta sudesaparición (fase de regresión). Los niveles de P4 mostraron correlación positiva con el diámetro del CL (r=0,54; P<0,01), aumentando los niveles de P4 durante la fase de crecimiento del CL y disminuyendo durante su regresión, con poca variación durante la fase de meseta. Estos resultados permiten señalar que la dinámica folicular en vacas Brahman presenta los mismos patrones observados en ganado Bos indicus, previamente reportados.

To characterize the follicular dynamics during the estrous cycle (EC) in Brahman cows, 12 ECs with a mean duration of 21.3 ± 0.7 d (range= 19-24 d), were evaluated. Seventy five percent (9/12) of the EC’s had two waves of follicular growth (FG; 20.6+0.5 d), emerging on days 1.6+0.4 and 8.4+0.4, respectively. In EC’s of one wave of FG (2/12), emergence occurred on day 14.5+0.7; whereas in EC’s with three waves (1/12), waves emerged on days 2, 10 and 17, respectively. During the EC, the number of follicles (Class 1 [C1]= ≤ 5 mm, Class 2 [C2]= 6-9 mm; Class 3 [C3]= ≥ 10 mm) changed, showing a decrease in C1 follicles and an increase in C2 follicles, during the recruitment phase, and a decrease in C2 follicles during the selection phase, with an increase in C3 follicles. The growth rate of the dominant follicle (DF; DF1=0.78 ± 0.1 mm/d; FD2= 0.40 ± 0.1 mm/d) was greater (P<0.05) than the growth rate for subordinate follicles (SF1=-0.01 ± 0.1 mm/d; SF2=0.22 ± 0.1 mm/d). There was no difference in size between DF1 and DF2 (12.2±0.4 vs. 12.7 ± 0.4 mm). From the beginning the diameter of the corpus luteum (CL) increased (growth phase) until it reached the maximum size (plateau phase), to decrease due to its regression. Plasma progesterone (P4) levels showed a positive correlation (r=0.54; P< 0.01) with the diameter of the CL. These results allowed to conclude that the follicular dynamics during the EC in Brahman cows had the same patterns observed in Bos indicus and Bos taurus cattle, previously reported.

Efecto de la Equilibración y la Tasa de Enfriamiento sobre la Viabilidad Post Vitrificación de Embriones Murinos / Effect of Equilibration and Cooling Rate on the Post Vitrification Viability of Murine Embryos

La técnica de criopreservación de embriones por vitrificación ha adquirido gran relevancia a nivel mundial debido a lo fácil de su ejecución, a los costos reducidos en equipos requeridos y, además por los altos niveles de viabilidad de embriones post vitrificación. Sin embargo, existe gran variabilidad entre los protocolos reportados, en especial en relación a las etapas de equilibración y enfriamiento. Con el objeto de contribuir al diseño de un protocolo estándar de vitrificación para la criopreservación de embriones murinos, se plantearon los siguientes experimentos: Experimento 1, se estudió el efecto de la tasa de enfriamiento (rápida y muy rápida) y el volumen de la solución (2µL y 1µL) sobre la viabilidad de embriones murinos post vitrificación, no observando efecto alguno del volumen de la solución (p>0,05), pero sí un efecto estadísticamente significativo (p<0,05) de la tasa de enfriamiento. Resaltando, que se obtuvo mejor resultado (81,3% de embriones viables), cuando se utilizó el protocolo de vitrificación Rápido-1 µL. Experimento 2, se evaluó la influencia del número de pasos y tiempo de equilibración sobre la viabilidad de embriones murinos, combinando protocolos de 4 pasos de exposición a los crioprotectores (1, 2, 3 y 4 pasos) y 4 tiempos de equilibración (5, 10, 15 y 20 min). La mayor tasa de viabilidad (p<0,05) fue obtenida empleando el protocolo 2 pasos-10min (93,8%). En conclusión, la presente investigación aporta detalles para la optimización del protocolo de vitrificación de embriones murinos.

The technique of cryopreservation of embryos by vitrification has acquired great relevance world-wide because of the easiness of the process, the low cost of the equipment, and the high levels of viability of the embryos after vitrification. Nevertheless, a great variability exists among the reported protocols, especially in relation to the steps of equilibration and cooling. In order to contribute to the design of a standard protocol of vitrification for murine embryos, the following experiments were conducted. Experiment 1 studied the effect of cooling rate (fast and very fast), and the volume of the solution (2µL and 1µL) on the viability of murine embryos post vitrification. No effect of the volume of the solution (p>0.05) was observed, but a significant (p<0.05) effect of the cooling rate was shown. Understanding that the best results (81.3% of viable embryos) were obtained when the Fast - 1µL protocol of vitrification was used. Experiment 2 evaluated the influence of the number of steps and the equilibration time on the viability of murine embryos, combining four step protocols of exposition to cryoprotectant (1, 2, 3 and 4 steps) and four times of equilibration (5, 10, 15 and 20 min). The highest rate of viability (p<0.05) was obtained with 2 steps-10min (93.8%). In conclusion, the present work gives details for the optimization of the vitrification protocol of murine embryos.

Efecto de la concentración de crioprotectores sobre la viabilidad post vitrificación de embriones murinos (mus musculus) / Effect of cryoprotectant concentration on the post vitrification morphological viability of murine embryos (mus musculus)

Con la finalidad de determinar la mejor solución de vitrificación (SV), usando Etilenglicol (EG), Glicerol (G) y Sucrosa (SUC), se evaluó la apariencia morfológica post vitrificación de embriones murinos (Mus musculus). Ocho mezclas diferentes de crioprotectores fueron evaluadas, con las siguientes concentraciones: SV1: 0% de crioprotectores; SV2: 50% EG; SV3: 50% G; SV4: 50% SUC; SV5: 25% EG + 25% G; SV6: 50% EG + 0,3M SUC; SV7: 50% G + 0.3M SUC y SV8: 25% EG + 25% G + 0,3M SUC. El mayor número de embriones (94,7%) con apariencia morfológica normal, fueron los equilibrados con SV5. No hubo diferencia significativa entre la SV8 (88,9%) y la SV5. Mientras que los embriones criopreservados con las soluciones restantes, presentaron viabilidad morfológica más baja (p<0,05). Estos resultados sugieren que la SV5 provee mejor tolerancia al proceso de vitrificación, observándose en los embriones la más alta viabilidad y la más baja frecuencia de anormalidades morfológicas. Estos hallazgos contribuyen de manera importante, en la selección de los crioprotectores para la vitrificación.

In order to determine the best vitrification solution (VS), using ethylene glycol (EG), glycerol (G) and sucrose (SUC), the post vitrification morphology in murine embryos (Mus musculus) was evaluated. Eight different mixtures of these chemicals, with the following concentrations: VS1: 0%; VS2: 50% EG; VS3: 50% G; VS4: 50% SUC; VS5: 25% EG + 25% G; VS6: 50% EG + 0.3M SUC; VS7: 50% G + 0.3M SUC and SV8: 25% EG + 25% G + 0.3M SUC, were used. VS5 was the solution with the highest percentage (94,7%) of embryos with normal morphology. There were no significant differences between the VS8 (88.9%) and VS5. However, embryos cryopreserved with the other solutions had a lower morphological viability (p<0.05). These results suggest that VS5 provides embryos with better tolerance to the vitrification process, because a higher viability and lower frequency of morphological abnormalities were present. These findings provide details of great importance to the selection of cryoprotectants for vitrification.

Depressive symptoms evaluated by the Calgary Depression Scale for Schizophrenia (CDSS): genetic vulnerability and sex effects.

The present study compares the occurrence of depressive symptoms evaluated by the Calgary Depression Scale for Schizophrenia (CDSS) in patients of Multiplex (MS) and Simplex Schizophrenia families (SS). The Positive and Negative Syndrome Scale (PANSS) was used to evaluate psychopathology. A total of 206 paranoid schizophrenia patients were studied according DSM-IV criteria. The Family Interview for Genetic Studies (FIGS) was used to study the families. A result in the FIGS for a positive family history of schizophrenia was referred as MS (patients); its lack as SS (patients). CDSS scores were compared among MS and SS patients and possible sex differences intra- and inter-groups were explored. In the analysis of our sample (30) 19% of the total persons with schizophrenia group was depressed. The depressive symptoms measured by the CDSS were higher in females and the MS males group. Males from MS group showed more depressive symptoms than males from SS group. No differences with females from both groups were found. Findings in this study underscore the importance of gender and family history in understanding the heterogeneity of schizophrenia. This study suggests that sex and familiar history are important to consider in studying depressive symptoms.

Producción in vitro de embriones bovinos / In vitro production of bovine embryos

El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y validar las técnicas de fertilización in vitro (FIV) y producción de embriones bovinos in vitro en el Laboratorio de Biotecnología del Instituto de Reproducción Animal de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Central de Venezuela. De un total de 544 ovocitos obtenidos de ovarios recolectados en el matadero y seleccionados para ser sometidos al proceso de FIV, se fertilizaron 399, obteniéndose una tasa de fertilización del 73,3 por ciento, alcanzando una tasa de desarrollo embrionario del 35,1 por ciento (191/544), un total de 74 mórulas (13,6 por ciento) y 9 blastocitos transferibles (1,6 por ciento). De acuerdo a su morfología, de 148 ovocitos rodeados de más de 6 capas de células del cumulus, se fertilizaron 107 (72,2 por ciento) con una tasa de desarrollo embrionario de 35,1 por ciento (52/147); mientras que los ovocitos rodeados de 4 a 6 capas de células del cumulus, alcanzaron una tasa de fertilización de 81,8 por ciento (122/149) y una tasa de división embrionaria de 46,3 por ciento (69/149). Ovocitos que presentaban 2 a 3 capas de células del cumulus para el momento de la maduración, alcanzaron una tasa de fertilización de 76,9 por ciento (117/152) con una tasa de división embrionaria de 36,8 por ciento (56/152). En el grupo de ovocitos que estaban desnudos para el momento de la maduración, se observó una tasa de fertilización mucho menor (55,7 por ciento; 53/95), así como una tasa de desarrollo embrionario de 14,7 por ciento (14/95). Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad del desarrollo e implementación de la técnica de FIV para la producción de embriones bovinos in vitro que permita aumentar la producción, selección y comercialización de embriones bovinos, con el objetivo de impulsar la industria de transferencia de embriones y utilizar esta metodología como base para el desarrollo de otras biotecnologías.

Irrigación arterial y venosa del útero y los ovarios de la perra (Canis familiaris) y su relación con la actividad ovárica / Arterial and venous supply of the uterus and ovaries in the bitch (Caninis familiaris) and its relationship with ovarian activity

Con el objetivo de describir las caracetrísticas anatómicas de la vascularización arterial y venosa del útero y los ovarios, el ciclo estral de nueve perras fue monitoreado utilizando citologías vaginales y ultrasonografía para inferir el mecanismo por el cual el útero ejerce su efecto sobre el ovario mediante técnicas radiográficas, clarificación de tejidos y maceración tisular. El estudio comprobó que en todas las fases del ciclo estral, el útero y los ovarios de la perra están irrigados principalmente por las arterias ovárica, uterina y vaginal, las cuales establecen anastomosis ipsilaterales entre ellas y contralaterales entre las arterias uterinas y vaginal. En el ligamento ancho, la vena uterina forma un circuito de dos ramas que se anastomosan craneal y caudalmente para permitir la conexión venosa entre el ovario y el cuerno ipsilateral al mismo. Pudo observarse a simple vista que en los especímenes provenientes de perras en fases de proestro y estro, el número de grosor de los vasos sanguíneos que irrigan el tracto reproductor es mayor en comparación con los especímenes provenientes de perras en fases de diestro y anestro. Estos estudios sugieren la necesidad de realizar investigaciones más avanzadas con el uso de hormonas marcadas para dilucidar el mecanismo de luteólisis en esta especie.

Vitrificación: una alternativa para la criopreservación de embriones / Vitrification: an embryo cryopreservation alternative

A nivel mundial, la técnica de criopreservación de embriones mamíferos más utilizada es la criopreservación lenta o estándar, la cual hace uso de equipos de criopreservación programados que descienden la temperatura a una tasa constante; sin embargo, la implementación de técnicas avanzadas de criopreservación como la vitrificación, surge como una alternativa factible. Debido a la importancia que ha tomado esta técnica de criopreservación desde su aparición en 1985, se ha desarrollado la presente revisión, abordando aspectos básicos de la técnica y detallando algunos factores que intervienen en todo el proceso de vitrificación de embriones.

Efecto del aislamiento del carnero durante el preparto sobre la actividad ovárica postparto en ovejas West African / Effect of prepartum ram isolation on postpartum ovarian activity in West Africam ewes

Con el objeto de estudiar el efecto del aislamiento del carnero durante el período preparto sobre la actividad ovárica postparto, 29 ovejas lactantes de la raza West African, entre 21 y 77 meses de edad (igual o mayor a dos partos), fueron asignados al azar, en: un grupo continuamente expuesto al carnero (CEC; n = 15) en el cual las ovejas fueron expuestas al carnero desde los 60 días preparto hasta los 90 días postparto, y un grupo no continuamente expuesto al carnero (NEC; n = 14) en el cual las ovejas fueron aisladas del carnero durante los 60 días preparto y luego fueron expuestas al mismo, durante 90 días postparto. El peso y condición corporal fueron tomados cada dos semanas durante los 90 días postparto. La detección visual del celo fue realizada diariamente; y muestras de sangre fueron tomadas dos veces por semana, durante el mismo período, para determinar las concentraciones de progesterona (P4). El diagnóstico de preñez fue basado en el no retorno del celo y confirmado por la evaluación ecográfica a los 150 días postparto. No hubo diferencias (P>0,10) entre ambos grupos para los intervalos: parto-inicio de la actividad luteal (CEC = 41,8 ± 4,5 vs. NEC = 35,8 ± 3,5 días), parto-primer celo (CEC = 49,6 ± 4,6 vs. NEC = 42,5 ± 3,5 días) y parto-concepción (CEC = 50,0 ± 3,1 vs. NEC = 46,2 ± 4,0 días). Asimismo, las concentraciones de P4 en plasma, durante los primeros 53 días postparto, no fueron diferentes (P>0,05) entre los grupos (CEC = 0,9 ± 0,1 vs. NEC = 1,1 ± 0,1 ng/mL). Los hallazgos del presente estudio indican que, bajo las condiciones de este experimento, el aislamiento del carnero durante el período preparto no tuvo un efecto significativo en las concentraciones de P4, así como en el reinicio de la actividad luteal y estral durante el período postparto.

Efecto del amamantamiento de uno o dos corderos sobre la actividad ovárica postparto en ovejas mestizas de la raza West African / Suckling effect of one vs two lambs on postpartum ovarian activity in West African ewes

Para estudiar el efecto del amamantamiento de uno o más corderos sobre la actividad ovarica postparto en ovejas tropicales, se analizaron los datos de 29 ovejas lactantes, mestizas West African con dos o más partos, distribuidas en: un grupo de ovejas que amamantaron un solo cordero (1C; n=18) y otro grupo de ovejas que amamantaron dos corderos (2C; n=11) durante un período de 90 días después del parto. Se midió el peso corporal el día del parto y luego cada dos semanas. El reinicio de la actividad ovárica se determinó a través de los niveles de progesterona (P4) en plasma. La detección diaria del celo fue realizada por observación visual directa y el diagnóstico de gestación se llevó a cabo por el no retorno del celo y por evaluación ultrasonográficas los 150 días postparto. Los datos se analizaron a través de análisis de varianza para modelos lineales generales y modeos mixtos. No hubo diferencias significativas (P>0,05) para los intervalos partoreinicio de actividad luteal (1C= 31,6 ± 2,5 días vs 2C= 39,6 ± 3,2 días), parto-primer celo (1C= 47,6 ± 2,3 d¡as vs 2C= 47,7 ± 2,9 días) y parto-concepción (1C= 50,7 ± 2,6 días vs 2C= 49,6 ± 3,4 días). Tampoco hubo diferencias (P>0,05) en la concentración diaria de P4 en plasma a los 53 días (1C= 1,1 ± 0,1 vs 2C= 0,8 ± 0,1 ng/mL). Sin embargo, se obtuvo un incremento sostenido, de los niveles de P4>1 ng/mL en el grupo 1C, partir del día 25; mientras este nivel solo fue logrado por el grupo 2C a partir del día 39. La P4 acumulada durante los primeros 53 días postparto fue mayor (P>0,001) en las ovejas del grupo 1C (18,8 ng/mL) que en las ovejas del grupo 2C (14,1 ng/mL). Los resultados permiten suponer que el número de corderos ejerce un efecto supresor sobre la producción de P4 durante el postparto y, por lo tanto sobre el reinicio de la actividd luteal, en ovejas West African bajo condiciones tropicales, no siendo así para los intervalos parto primer celo y parto concepción.

Biochemical, immunological and toxicological characteristics of the crystal proteins of Bacillus thuringiensis subsp. medellin

Characterization of the inseticidal and hemolytic activity of solubilized crystal proteins of Bacillus thuringiensis (Bt) subsp. medellin (Btmed) was perfomed and compared to solubilized crystal proteins of isolates 1884 of B. thuringiensis subsp. israelensis (Bti) and isolate PG-14 of B. thuringiensis subsp. morrisoni (Btm). In general, at acid pH values solubilization of the Bt crystalline parasporal inclusions (CPI) was lower than at alkaline pH. The larvicidal activity demonstrated by the CPI of Btmed indicated that optimal solubilization of CPI takes place at a pH value of 11.3, in Bti at pH values from 5.03 to 11.3 and in Btm at pH values from 9.05 to 11.3. Hemolytic activity against sheep red blood cells was mainly found following extraction at pH 11.3 in all Bt strains tested. Polyacrylamide gel electrophoresis under denaturing conditions revealed that optimal solubilization of the CPI in all Bt strains takes place at the alkaline pH values from 9.05 to 11.3. An enriched preparation of Btmed crystals was obtained, solubilized and crystal proteins were separated on a size exclusion column (Sephacryl S-200). Three main protein peaks were observed on the chromatogram. The first peak had two main proteins that migrate between 90 to 100kDa. These proteins are apparently not common to other Bt strains isolated to date. The second and third peaks obtained from the size exclusion column yielded polypeptides of 68 and 28-30 kDa, respectively. Each peak independently, showed toxicity against 1 st instar Culex quinquefasciatus larvae. Interestingly, combinations of the fractions corresponding to the 68 and 30 kDa protein showed an increased toxicity. These results suggest that the 94 kDa protein is an important component of the Btmed toxins with the highest potency to kill mosquito larvae. When crystal proteins of Bti were probed with antisera raised independently against the three main protein fractions of Btmed, the only crystal protein that showed cross reaction was the 28 kDa protein. These data suggest that Btmed could be an alternative bacterium for mosquito control programs in case mosquito larval resistance emerges to Bti toxic proteins.